Метод кнотта дирофиляриоз

Диагностика дирофиляриоза у собак. Dirofilaria immitis (сердечный червь)

Метод кнотта дирофиляриоз

Дирофиляриоз — заболевание, вызываемое паразитированием нематоды рода Dirofilaria в организме. Это гельминтоз, характеризующийся медленным развитием и длительным хроническим течением.

Заражение происходит трансмиссивным путем через укусы кровососущих комаров, заражённых инвазионными личинками дирофилярий. Источником заражения комаров обычно являются инвазированные домашние собаки, а также кошки, реже дикие животные.

Возбудитель дирофиляриоза относится к классу круглых червей Nematoda, отряду Spirurina, подотряду Spiruromorpha, семейству Filarioidea, роду Dirofilaria. Всего описано несколько видов червей, из которых наибольшее распространение имеют Dirofilaria repens, Dirofilaria immitis.

Дирофилярии развиваются с двойной сменой хозяев. Первый хозяин (основной или дефинитивный)  – млекопитающее, второй хозяин (промежуточный) – комар.

Жизненный цикл irofilaria immitis обычно составляет от 7 до 9 месяцев.

Половозрелые оплодотворенные самки рождают в кровь дефинитивного хозяина микрофилярии, которые, не изменяясь морфологически, циркулируют в кровеносной системе до своей гибели или до того момента, когда попадут к кровососущему насекомому, при этом сначала микрофилярии попадают с кровью в кишечник комара, затем они мигрируют в полость тела и развиваются до инвазионной стадии в мальпигиевых сосудах комара.

Далее личинки концентрируются в головном отделе и нижней губе насекомого, при последующем кровососании они активно внедряются в кожу млекопитающего и продолжают развиваться до половозрелой стадии.

Человек может быть заражен микрофиляриями, но он является случайным, тупиковым хозяином червей Dirofilaria, поскольку самки не достигают в его организме половой зрелости. Как полагают, большинство личинок при попадании в организм человека гибнет.

Микрофилярии выделяются в кровь собаки, где они циркулируют, чтобы попасть в комара, который питается кровью зараженной собаки. Комары являются промежуточными хозяевами и переносчиками сердечных червей.

После того как микрофилярии попадают к комару, они претерпевают несколько линек в его кишечнике и перемещаются в ротовой аппарат, где превращаются в личинок третьей стадии, способных заражать окончательного хозяина.

Яйцевые шары нематоды Dirofilaria repens

Яйцевые шары и микрофилярии нематоды Dirofilaria repens

Яйцевые шары нематоды Dirofilaria repens

Микрофилярия нематод Dirofilaria immitis,
Dirofilaria repens в крови у основного хозяина

Яйцевые шары нематоды Dirofilaria repens

Микрофилярия нематод Dirofilaria immitis,
Dirofilaria repens в крови у основного хозяина

Микрофилярия нематод Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens в крови у основного хозяина

Микрофилярия нематод Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens в крови у основного хозяина

Зараженный комар, питаясь кровью окончательного хозяина, заражает ее микрофиляриями. Личинки 3 стадии, приблизительно 1 мм длиной, попадают в организм животного. В течении приблизительно трех дней после попадания в организм хозяина личинка остается в месте укуса комара.

Там происходит линька до 4 стадии в течении 3-12 дней после заражения. Через 2-3 недели личинка начинает мигрировать и расти, достигая размера приблизительно 4 мм через месяц и 1 см через 2 месяца.

По сравнению с окончательным размером взрослого червя личинка все еще очень маленькая. Далее личинка мигрирует через мышцы, достигает вен, по которым транспортируется вместе с кровотоком в сердце и легкие.

Через 50 дней после заражения происходит финальная линька во взрослую особь, и черви попадают в сосуды легких через 70 дней после первичного заражения.

Когда черви достигают легких, давление крови вдавливают их в мелкие легочные артерии. По мере роста паразиты захватывают более крупные артерии.

Самки становятся половозрелыми приблизительно через 120 дней после заражения, следовательно, через 6 месяцев после заражения начинают выделяться микрофилярии. У собаки, зараженной сердечными червями, инфекция может поддерживаться 7,5 лет (т.е.

, в течении этого времени могут развиваться микрофилярии), а микрофилярии, попавшие в кровоток, могут жить там более 2х лет.

Разрушение легочных артерий начинается вскоре после попадания сердечных червей в сердце и легкие; даже несколько живых паразитов могут вызвать заболевание. Признаками типичного заражения сердечными червями являются кашель, повышенная утомляемость, летаргия и внезапная слабость.

Dirofilaria immitis в сердце собаки

Dirofilaria immitis

Dirofilaria immitis

Диагностика дирофиляриоза у собак.

1. Обнаружение антигена половозрелой самки.

Тестирование на наличие антигена половозрелой самки является одним из наиболее чувствительных методов диагностики наличия сердечных червей.

Поскольку доступные в продаже тесты направлены на выявление белка, выделяющегося из матки половозрелой самки червя, самое раннее время, в которое инфекция может быть диагностирована, составляет приблизительно 5 месяцев после заражения.

Уровень антигенимии прямо пропорционален количеству женских особей, и эти тесты очень специфические (т.е., ложно-положительные результаты крайне маловероятны), но эти тест-системы могут не обнаруживать инфекцию у собак c маленьким количеством взрослых червей.

Причины ложно отрицательных результатов при использовании тестов на наличие антигена половозрелой самки:

– низкое количество половозрелых женских особей

– самки присутствуют, но они еще не половозрелые (требуется, по меньшей мере, 5 месяцев после заражения, чтобы самка созрела)

– присутствуют только самцы

2. Выявление микрофилярий в крови или тест Кнотта.

Хотя отсутствие микрофилярий в крови не исключает диагноза дирофиляриоз, обнаружение микрофилярий в крови может свидетельствовать о том, что собака заражена сердечными червями (требуется дополнительная дифференцировка от Dirofilaria repens).

Причины ложноотрицательных результатов теста Кнотта:

– черви еще не половозрелые и не выделяют микрофилярий (для созревания требуется, по меньшей мере, 6 месяцев)

– взрослые особи одного пола

– собаке вводили макроциклические лактоновые препараты, обладающие микрофиляриецидной активностью, т.е., у собаки есть половозрелые взрослые особи, но нет микрофилярий

– микрофилярии выделяются, но уничтожаются иммунной системой хозяина

3. Диагностика методом ПЦР. Дифференцировка Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens.

Диагностика методом ПЦР чаще всего проводится при обнаружении микрофилярий в крови, и целью данного способа является определение видовой принадлежности микрофилярий. Кроме Dirofilaria immitis можно обнаружить червя Dirofilaria repens,  вызывающего кожные поражения, и не требующего серьезного лечения.

Причины ложноотрицательных результатов при проведении ПЦР:

– отсутствие микрофилярий в крови животного.

16 мая 2015

© ООО Независимая ветеринарная лаборатория ПОИСК

Источник: https://labpoisk.ru/services/parazitologicheskie-issledovaniya/diagnostika-dirofilyarioza-u-sobak-dirofilaria-immitis-serdechnyy-cherv/

Веттест – ветеринарная лабораторная служба :: дирофиляриоз

Метод кнотта дирофиляриоз

Дирофиляриоз – это инвазионное заболевание, вызываемое нематодами рода Dirofilaria. Дирофиляриозом болеют собаки, кошки, дикие плотоядные и человек.

Переносчиком заболевания являются комары, именно поэтому чаще всего дирофиляриозом болеют собаки – от укуса комара кошек часто защищает густая шерсть и подшерсток. Пораженность городских собак различная от 3,5 до 30% в зависимости от региона.

Циркуляция возбудителя происходит следующим образом: комар кусает инфицированное животное, вследствие этого происходит заражение насекомого. Затем тот же комар садится на еще “здоровое” животное и заражает его. Именно в организме комара дирофилярия дозревает до инвазивной стадии. Пораженность комаров личинками разная – от 2,5% (Anopheles) до 30% (Aedes).

Заболевание сезонно: заражение животных особенно активно происходит с мая по сентябрь. В условиях городской квартиры циркуляция инвазии при наличии больной собаки или кошки может происходить круглогодично «подвальными» комарами.

Для лечащего ветеринара особое значение имеют два вида дирофилярий: D. immitis, которая в половозрелой форме локализуется в полости сердца и крупных сосудах и D. Repens, излюбленное место которой – подкожная клетчатка.

А теперь вернемся к “неприятностям”, о которых мы упоминали выше. Паразитирование гельминта вызывает в организме животного ряд патогенных влияний: механическое, токсическое, аллергическое, иммунодепрессивное.

Взрослые особи дирофилярий локализуются в полости сердца, поэтому можно говорить о том, что наибольшему влиянию подвержены сердечно-сосудистая и дыхательная системы. У больных отмечают появление сухого кашля, хрипы в легких, повышенную утомляемость, одышку, снижение веса, сердечную недостаточность, шумы в сердце при аускультации, учащенное сердцебиение.

Возможно появление отеков, особенно в межчелюстном пространстве и нижних отделах конечностей, отмечают цианоз кожи и слизистых оболочек. Развивается почечная недостаточность. В результате того, что дирофилярии могут блокировать артерии, повышается давление в кровеносных сосудах печени, что приводит к гемолизу, анемии, гемоглобинурии, билирубинемии.

Появляется слабость тазовых конечностей. Стенки сосудов, в которых обитают микрофилярии, утолщены, просветы капилляров сужены, нередко вокруг капилляров встречаются кровоизлияния. Надо отметить, что преобладает правосторонняя локализация гельминта.

Дирофиляриоз подкожной клетчатки протекает с кожным синдромом – происходит утолщение кожи, образование кожных узелков и дерматитов. Поражается кожа головы, спины и конечностей (межпальцевое пространство). Животное обычно страдает от дерматитов, зуда, высыпаний. Но это совсем не затрагивает внутренние органы и не составляет никакой угрозы для жизни собаки.

Рассматриваемые гельминты в виде личинок и настоящих червей располагаются в этом случае в подкожно-жировой клетчатке, успешно удаляются хирургическим путем, и после терапевтического курса, который при этом недомогании показан после оперативного вмешательства, болезнь уходит.

В диагностике дирофиляриоза оценка клинико-эпидемиологической ситуации не имеет большого значения, так как сбор эпидемиологического анамнеза (наличие инфицированных собак вблизи, укусы комаров, посещение леса) малоинформативен в плане постановки диагноза.

Клинические признаки при дирофиляриозе довольно расплывчаты, а кроме того, зараженные животные могут оставаться асимптоматичными в течение нескольких месяцев.

Тогда как лабораторная диагностика дает исчерпывающий результат на вопрос: так заражено ли животное дирофиляриозом или нет?

В лаборатории “Веттест” существует специальный профиль для обнаружения обеих форм дирофилярий: личинок, циркулирующих в крови (микрофилярий) и половозрелых особей, которые осели в сердце (собственно дирофилярии): в направлении №1 данный профиль находиться под №3-14 (метод Кнотта и ИХ), также существуют отдельные исследования №3-15(метод Кнотта) и 16-75(Дирофиляриоз ИХ). Рассмотрим оба вида исследования подробнее:

1.Метод Кнотта – приготовление специального препарата из цельной крови.

Часто микрофилярий выявляют в окрашенном мазке крови в рамках рутинного выполнения анализа. *При обнаружении в окрашенном мазке микрофилярий Вам обязательно придет результат со специальным примечанием, в котором будет указано наличие особей в организме животного.

Однако, так как при выполнении обычного анализа крови используют только одну каплю крови, низкое количество паразитов можно пропустить. В таком случае метод Кнотта – идеальный тип исследования: за счет концентрирования микрофилярий из большего объема появляется 100%-ная вероятность нахождения паразитов в крови у исследуемого животного. 

ВАЖНО:

●Тест рекомендуется проводить до начала терапии диэтилкарбамазином, так как у животных с циркулирующими микрофиляриями этот препарат может привести к летальному исходу.

●Циркулирующие микрофилярии часто отсутствуют у инфицированных собак, получающих профилактическую терапию, например, ивермектином и милбемицином.

●Может быть ложноотрицательный результат при заказе только метода Кнотта в случае, если не было проведено исследование на сердечную форму (так как в таком случае в организме животного могут присутствовать только взрослые формы паразита на момент проведения анализа).

Действия: смешивают цельную крови с формалином, центрифугируют, надосадочную жидкость сливают. Осадок смешивают с метиленовым синим и переносят смесь на предметное стекло, где микроскопируют. При исследовании количество особей подсчитывают, затем обязательно внося их число в бланк ответа.

Микрофилярия в препарате Кнотта.

2. ИХ-тест на дирофиляриоз-тест, основанный на принципе иммунохроматографического анализа: антигены дирофилярий связываются со специфическими антителами, нанесенными на мембрану иммунохроматографической полоски. В результате образуется комплекс, видимый в форме линии.

ВАЖНО: 

● Циркулирующие микрофилярии отсутствуют приблизительно у 25% собак, инвазированных паразитами взрослой стадии.

● Следует помнить, что результат исследования обычно положителен через 6-7 месяцев после инфицирования. Ложноотрицательные результаты также имеют место быть: при инфицировании только самцами паразитов и на протяжении препатентного периода.

Действия: в качестве материала используют сыворотку, плазму крови, которую капают в тест-окно на специализированной кассете. Затем считывают результаты по инструкции.

Нельзя не отметить, что лаборатория “Веттест” сотрудничает с одной из самых крупных фирм-производителей наборов для ИХ-тестов.

Напоминаем, что лишь в 1% случаев во время патентного периода будет наблюдаться присутствие микрофилярий в русле крови при отсутствия положительной реакции ИХ.

Источник: http://www.xn--b1aga2cdac.xn--p1ai/koshki-ubiytsyi.html

Диагностика дирофиляриоза (dirofilaria immitis) городских собак

Метод кнотта дирофиляриоз

ДИАГНОСТИКА  ДИРОФИЛЯРИОЗА  (DIROFILARIAIMMITIS)  ГОРОДСКИХ  СОБАК

Коколова  Людмила  Михайловна

д-р  вет.  наук,  заведующая  лабораторией  гельминтологии

Якутский  научно-исследовательский  институт  сельского  хозяйства,  РФ,  г.  Якутск

Emailkokolova_lm@mail.ru

Касьянова  Сардана  Степановна

аспирант  лаборатории  гельминтологии,  Якутский  научно-исследовательский  институт  сельского  хозяйства,  РФ,  г.  Якутск

DIAGNOSTICIAN  DIROFILARIADEA  (DIROFILARIA  IMMITIS)  MUNICIPAL  DOGS

Kokolova  Luidmila

doctor  of  veterinary  sciences,  manager  by  the  laboratory  of  helmintology  Yakutskii  researche  institute  of  agriculture,  Russia,  Yakutsk

Kasjanova  Sardana

graduate  student  of  laboratory  of  helmintology,  Yakutskii  researche  institute  of  agriculture,  Russia,  Yakutsk

АННОТАЦИЯ

Дирофиляриоз  распространен  в  субтропических  в  регионах  Азии,  Австралии,  Америки  и  Южной  Европы  [1].  В  Якутии,  в  г.  Якутске  и  его  окрестностях  ранее  были  регистрированы  завозные  случаи  инвазии,  а  в  настоящее  время  заболевание  регистрируется  ежегодно  и  численность  заболевших  и  умерших  собак  с  каждым  годом  увеличивается. 

Целью  нашего  исследования  было  изучение  методов  обнаружения  микрофилярий  в  крови  собак  и  проведения  опытов  по  лечению  больных  дирофиляриозом  собак.

ABSTRACT

Dirofilyarioz  is  widespread  in  subtropical  in  regions  of  Asia,  Australia,  America  and  Southern  Europe  [1].  In  Yakutia,  in  Yakutsk  and  its  vicinities  there  were  registrirovana  brought  in  cases  of  an  invasion  earlier,  and  now  the  disease  is  registered  annually  and  the  number  of  the  diseased  and  dead  of  dogs  increases  every  year. 

Studying  of  methods  of  detection  of  mikrofilyariya  in  blood  of  dogs  and  carrying  out  experiments  on  treatment  of  patients  dirofilyariozy  dogs  was  the  purpose  of  our  research.

Ключевые  слова:  дирофиляриоз;  собака;  инвазия;  сердце;  кровь;  микрофилярия;  зооноз.

Keywords:  dirofilaridea;  canis;  invasia;  cors;  gore;  microfilaria;  zoonozie.

Дирофиляриоз  —  трансмиссивное  зоонозное  инвазионное  заболевание,  вызываемое  нематодами  подотряда  Filariata  Skrjabin,  1915,  и  характеризующееся  сердечными,  легочными,  почечными,  кожными  и  другими  осложнениями.  Дирофиляриозом  болеют  дикие  плотоядные,  собаки,  кошки  и  человек.

  Возбудители  заболевания  —  нематоды  семейства  Onchocercidae  (Leiper,  1911,  sub.-fam.)  Chabaud  et  Anderson,  1959,  виды:  Dirofilaria  immitis  (Leidy,  1856);  Dirofilaria  (Nochtiella)  repens  (Railliet  et  Henry,  1911);  Dipetalonema  (Acanthocheilonema)  dracunculoides  (Cobbold,  1870);  Dipetalonema  (A.

)  reconditum  (Grassi,  1890);  Dipetalonema  (A.)  grassi  (Noe,1907).  У  собак  паразитируют  несколько  видов.

  Вид  Dirofilaria  immitis  половозрелые  формы  нематод  обнаруживают  в  правой  половине  сердце  и  легочной  артерии;  вид  Dirofilaria  repens  —  в  подкожной  клетчатке;  вид  Dipetalonema  dracunculoides  —  в  полости  тела;  Dipetalonema  reconditum  —  в  околопочечной  жировой  ткани;  Dipetalonema  grassi  —  как  в  полости  тела,  так  и  в  подкожной  и  межмышечной  соединительной  ткани.  Личиночные  формы  упомянутых  филярий  —  микрофилярий  локализуются  в  крови  собак,  за  исключением  Dipetalonema  grassi,  личинки  которых  обитают  в  лимфе  соединительнотканных  элементов.

С  клинической  точки  зрения  вид  Dirofilaria  immitis  вызывает  тяжелые  патологические  изменения  в  сердце,  легочной  артерии,  легких,  печени  и  других  органов  у  собак.  Кроме  того  Dirofilaria  immitis  и  Dirofilaria  repens  являются  зоонозами  и  там  где  болезнь  эндемична,  существует  риск  развития  легочных,  подкожных  и  других  поражений  у  человека.

Учитывая,  что  клинические  признаки  дирофиляриоза  собак  являются  неспецифичными,  решающее  значение  при  постановке  диагноза  имеет  лабораторные  исследования  с  целью  выявления  микрофилярий  в  крови.

  Нами  в  лабораторных  условиях  применены  четыре  метода  обнаружения  микрофилярий  в  крови  собаки:  метод  тонкого  фиксированного  мазка  с  окраской  по  Романовскому-Гимза;  метод  толстой  раздавленной  капли;  метод  обогащения  Кнотта;  метод  центрифугирования  с  дистиллированной  водой. 

Брали  кровь  для  исследования  до  5  мл,  в  качестве  антикоагулянта  использовали  5  %-ный  раствор  цитрата  натрия  в  соотношении  1:20,  исследуем  в  день  взятие  пробы.

  При  исследовании  методом  тонкого  фиксированного  мазка  с  окраской  по  Романовскому-Гимза  взятую  пробу  крови  тщательно  перемешиваем,  наносим  каплю  на  предметное  стекло,  с  помощью  шлифованного  стекла  делаем  тонкий  мазок,  высушиваем,  фиксируем  этиловым  спиртом  10  минут  и  окрашиваем  по  Романовскому-Гимза,  окрашенные  мазки  промываем  проточной  водой  и  подсушиваем,  затем  изучаем  под  малым  увеличением  микроскопа,  таким  образом,  микрофилярии  обнаружены  в  6  (13,3  %)  пробах  из  45  исследуемых  нами  мазков.  Самый  простым  и  быстро  выполнимым  методом  исследования  для  нас  был  исследование  толстой  раздавленной  капли  крови.  Пробирку  со  взятой  пробой  крови  также  тщательно  встряхивали,  затем  наносили  3  капли  на  предметное  стекло,  накрывали  покровным  стеклом  и  сразу  же  исследовали  под  малым  увеличением.  Находили  подвижных  микрофилярий  всегда  даже  при  малой  микрофиляремии,  т.  е.  единичные  (фото  1).  Таким  образом,  мы  обнаружили  из  45  проб  для  исследования  в  10  пробах.  Проведение  исследования  методом  Кнотта  по  сложнее,  к  1  мл  добавляем  10  мл  2  %-ного  раствора  формалина.  Смесь  центрифугировали  5  минут  при  скорости  1500  об./мин.  Насадочную  часть  сливаем,  оставляя  1  мл  и  порционно  и  исследовали  по  малым  увеличением  микроскопа.  Метод  классический  и  показывает  высокую  эффективность  даже  при  низкой  микрофиляремии,  микрофилярии  были  обнаружены  в  10  пробах,  но  этот  метод  не  дает  возможность  исследовать  жизнеспособность  микрофилярий,  так  как  личинки  под  действием  формалина  фиксируются  и  погибают,  под  микроскопом  мы  обнаруживали  не  подвижные  и  прямые  личинки.  Четвертый  способ  исследования  метод  центрифугирования  крови  с  дистиллированной  водой  (Ястреб  В.Б.,  2004)  [2],  перед  исследованием  кровь  тщательно  перемешивали,  в  пробирке  с  объемом  10  мл  1  мл  крови  и  добавляли  до  10  мл  дистиллированной  воды,  отстаивали  5  минут,  центрифугировали  при  скорости  2000  об./мин.  Надосадочную  часть  пробы  до  1  мл  сливали  и  отставшую  часть  порционно  переносили  на  предметное  стекло  и  накрывали  покровным  стеклом,  в  этом  случае  личинки  оставались  подвижными  и  живыми.  В  этом  случае  обнаружили  микрофилярии  в  10  пробах  с  интенсивностью  от  1—2  до  15—20  личинок  в  1  мл  крови. 

Как  показали,  наши  исследования  все  методы  эффективны  для  обнаружения  микрофилярий  в  исследуемых  пробах  крови,  однако  предпочтительно  для  нас  были  методы  центрифугирования  с  дистиллированной  водой  (Ястреб  В.Б.

,  2004)  и  толстой  раздавленной  капли  крови,  так  как  в  них  .  обнаруженные  личинок  микрофилярий  оставались  жизнеспособными,  и  использовали  их  в  дальнейшем  в  лабораторных  опытах  по  изучении  жизнеспособности  микрофилярий.

  В  исследованных  из  45  проб  в  10  пробах  обнаруживали  микрофилярии  вида  Dirofilaria  immitis. 

Нам  также  известно,  что  вид  Dirofilaria  immitis  вызывает  наиболее  тяжелые  патологические  изменения  сердца  и  часто  приводит  к  гибели  животных.

  При  вскрытии  павших  животных,  дирофилярий  находили  в  правом  желудочке  и  в  полости  легочной  артерии  скопление  половозрелых  нематод  в  количестве  15  в  первом  случае  и  35  экз.

  во  втором,  на  месте  локализации  паразитов  наблюдали  тромбоз  и  гиперемия  стенки  желудочка  (фото  2). 

Лечение  дирофиляриоза  должно  быть  комплексным  и  основываться  на  определение  интенсивности  инвазии,  тяжести  течения,  с  учетом  сочетания  в  организме  собак  с  другими  заболеваниями.

  Первую  очередь  мы  проводили  ряд  комплексных  диагностических  исследований:  клинический,  биохимический  анализ  крови,  мочи  и  фекалий.

  Анализы  крови  иногда  позволяли  обнаруживать  сопутствующие  патологию  в  почке  или  печени,  исследование  УЗИ  обнаружило  мочекаменную  болезнь  почки  и  в  другом  случае  мочевого  пузыря,  исследование  фекалий  показало  паразитирование  и  других  видов  гельминтов,  в  данном  случае  токсакар.  Электро-  и  эхокардиография  помогает  диагностировать  и  выявить  риск  развития  тромбоэмболии.  Перед  лечением  дирофиляриоза,  согласно  классификации  Raynaud  (1992),  подразделяли  больных  собак  по  симптоматике  и  течении  инвазии  на  три  класса:

класс  1  —  субклинические  и  слабые  симптомы  болезни  было  4  случая;

класс  2  —  умеренная  степень  заболевания  —  4  случая;

класс  3  —  тяжелая  форма  болезни  (сердечная)  —  2  случая.

По  данной  квалификации  мы  в  опытах  были  определили  три  группы.

В  первой  опытной  группе  —  4  собаки  со  слабым  субклиническим  симптомом  болезни.  Проведена  поддерживающая  терапия  и  специфическое  лечение. 

Во  второй  группе  —  4  собаки  с  умеренным  степенем  заболевания,  проведена  сложная  поддерживающая  терапия  и  специфическое  лечение. 

В  третьей  группе  —  2  собаки  контроль,  без  проведение  специфического  лечения,  только  поддерживающая  терапия. 

Результаты  опытов:  в  первом  случае  с  слабым  симптомом  болезни  при  выявлении  в  крови  единичных  микрофилярий.

  Лечение  проведена  по  схеме:  до  введения  антипаразитарного  препарата  был  задан  антигистаминный  препарат  тавегил  в  дозе  0,05  мг/кг,  антикоагулянт  гепарин  подкожно  0,5  мл.

,  затем  проведена  специфическая  терапия  антгельминтным  препаратом  абиктин,  перорально  в  дозе  0,05  мг/кг.  Выздоровление  наступило  100  %-ный  эффект  при  однократном  пероральном  применении  абиктина  в  дозе  0,05  мг/кг  в  сочетании  с  тавегилом  и  гепарином.

Во  второй  группе  опытных  собак  при  умеренной  степени  заболевания,  проведение  сложной  поддерживающей  терапии  лечения  и  специфическое  лечение  было  необходимо  для  профилактики  осложнений.

  При  поддерживающей  терапии  применены  препараты:  сердечный  рибоксин,  улучшающие  циркуляцию  крови  трентал,  антикоагулянты  —  в  двух  случаях  аспирин  (таблетка)  и  двух  гепарин  (инъекция),  иммуностимуляторы  ронколейкин,  а  также  как  гепатопроектор  эссенциале  форте  и  специфическое  лечение  антипаразитарным  препаратом  абиктин  перорально  в  дозе  0,05  мг/кг.  Назначение  антикоагулянта  при  поддерживающей  терапии  исключает  возможность  закупорки  сосудов  микофиляриями  или  половозрелыми  дирофиляриями  возникающих  при  применении  антгельминтных  препаратов,  применение  антигистаминных  препаратов  снижает  риск  аллергии,  сердечные  препараты  поддерживают  сердечнососудистую  систему  организм,  в  частности  работу  сердце,  иммуностимуляторы  необходимы  для  восстановление  защитной  функции  организма.  Антигельминтный  препарат  абиктин,  в  данном  случае  был  применен  трекхкратно,  задан  в  дозе  0,05  мг/кг  с  интервалом  в  три  дня,  поддерживающая  терапия  в  течение  месяца  после  проведения  трехразовой  дегельминтизации. 

В  контрольной  группе  собак  —  с  тяжелой  формой  болезни,  была  проведена  только  поддерживающая  терапия,  дачей  препарат  тавегил  в  дозе  0,05  мг/кг  и  инфузионная  терапия  (различные  солевые  и  коллиодные  растворы),заболевание  была  с  летальным  исходом.

  При  вскрытии  контрольных  животных  были  обнаружены  в  правом  желудочке  и  в  полости  легочной  артерии  половозрелые  нематоды  Dirofilaria  immitis  в  одном  случае  15  экземпляров,  во  втором  35  экземпляров,  многочисленные  яйца  гельминтов  в  крови  паразитирование  многочисленных  микрофилярий.

Выводы.  Таким  образом,  на  территории  г.

  Якутска  и  его  окрестностях  зарегистрирована  местная  инвазия  дирофиляриоза  собак,  что  указывает  на  необходимость  тщательной  регистрации  и  анализа  каждого  случая  выявления  заболевания  собак,  определение  района  содержания  животного,  выявление  районов  с  наибольшим  риском  заражения  и  распространения  данной  инвазии,  усовершенствование  методов  диагностики,  терапии  и  профилактики  дирофиляриоза  городских  собак.  Необходимо  предупредить  заболевание,  чем  вылечить.  Профилактика  дирофиляриоза  в  первую  очередь  заключается  в  недопущении  контакта  животного  с  кровососущими  насекомыми.  Конечно,  Якутия  является  одним  из  регионов,  где  кровососущих  насекомых  достаточно  много,  их  можно  встретить  везде  и  значительном  количестве,  а  борьба  с  ними  не  приносит  положительных  результатов.  Поэтому  необходима  защита  животных  во  время  лета  комаров,  для  уничтожения  и  отпугивание  переносчиков  дирофилярий  можно  использовать  интектициды  и  репелленты,  а  против  личинок  в  водоемах  —  ларвициды  (фентион,  дурсбан),  но  они  обладают  сильным  токсическим  действием  для  животных  и  человека,  экологически  опасны  для  окружающей  нас  среды.

Список  литературы:

  1. Акбаев  М.Ш.  Паразитология  и  инвазионные  болезни  животных.  /  М.Ш.  Акбаев.  Уч.средних  спец.учеб.заведений.  М.  Колос,  2001.
  2. Ястреб  В.Б.  Сравнительное  изучение  методов  обнаружения  микрофилярий  в  крови  собак.  /В.Б.  Ястреб.  Мат.докл.научн.конф.  вып.  5.  М.  2005  —  с.  443—445.

Источник: https://sibac.info/conf/naturscience/xxvi/40584

Дирофиляриоз собак

Метод кнотта дирофиляриоз

Для исследования сыворотки крови в пробирку берут несколько миллилитров венозной крови от собаки. Кровь свертывается и микрофилярии мигрируют в сыворотку. Сыворотка со сгустком должна постоять в пробирке несколько часов. После этого пастеровской пипеткой берут несколько капель сыворотки со дна пробирки или из места на границе сыворотки и сгустка крови.

Эти капли помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа на наличие подвижных микродирофилярий. Если кровь до исследования находилась в холодильнике, то предметное стекло с каплями сыворотки выдерживают несколько минут при комнатной температуре для того, чтобы личинки дирофилярий восстановили свою подвижность.

Модифицированный метод Кнотта дает наилучшие результаты при практической постановке диагноза на наличие микрофилярий у собак. Метод заключается в следующем: к 1 мл венозной крови добавляют 10 мл 2%-ного раствора формалина.

Этот раствор хорошо перемешивают и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок смешивают с равным объемом метиленового синего в разведении 1:1000 и оставляют для окрашивания на 5 мин.

Окрашенный осадок микроскопируют для обнаружения фиксированных микрофилярии.

Точность этих тестов, обычно используемых в практике, повышается при их комплексном применении. Модифицированный метод Кнотта и миллипоровая фильтрация более чувствительны, потому что они концентрируют L1, повышая точность диагноза.

Однако ни один из этих методов не может исключать дирофиляриоз окончательно из-за распространенности амикрофиляриемической формы болезни и при небольшом количестве циркулирующих в крови личинок 1. Амикрофиляриемическая форма дирофиляриоза встречается примерно у 25% больных собак и связана, очевидно, с развитием иммунологических реакций, приводящих к лизису микрофилярий.

При амикрофиляриемической форме врач вынужден ставить диагноз на основании клинических, клинико-патологических, иммунологических, и рентгенографических результатов.

Приблизительно в 25 % случаев дирофиляриоза наблюдается амикрофиляриемическая форма инвазии эффективность тестов, описанных выше в подтверждении диагноза ограничена.

Метод непрямой иммунофлюоресценции используется, чтобы обнаружить антитела к микрофиляриям, и имеет специфическую полноценность при диагностике истинного дирофиляриоза и тех случаев, в которых L1 отсутствуют из-за иммунного разрушения.

Также разработан метод иммуноферментного анализа при диагностике дирофиляриоза (ELISA), при помощи которого можно обнаружить антитела к дирофиляриям или сам антиген. Тесты,обнаруживающие непосредственно дирофиляриозный антиген антиген, являются более предпочтительными.

Метод непрямой иммунофлюоресценции и ИФА разработаны за рубежом, где стали широко использоваться из-за их точности, чувствительности, специфичности и быстроты исполнения. После успешной терапии дирофиляриоза метод IFA (1 год) и ELISA (6 месяцев) дают положительный результат при определении антител.  

Рентгенография грудной полости хотя и не является хорошим методом для обнаружения – дирофилярий, но позволяет косвенно определить степени инвазии по оценке легочных паренхиматозных изменений. Рентгенографические изменения, которые развиваются на ранних стадиях болезни, присутствуют приблизительно в 85% случаев.

Рентгенографическные изменения включают увеличение правого желудочка (60% случаев), расширение легочной артерии в месте ее выхода из сердца 70%, расширение и увеличение рентгенографической плотности легочных артерий (50)%, а также извитость легочной артерии 50%.

Если при этом присутствует сердечная недостаточность, то отмечается увеличение синуса полых вен, печени и селезенки, а также наблюдается плевральный выпот или асцит.

Электрокардиография позволяет обнаружить аритмии, но по сравнению с рентгенографией не дает возможности выявить увеличение полостей сердца.  

Если по результатам рентгенографии нельзя предположить дирофиляриоз, то маловероятно, что электрокардиограмма поможет установить эту инвазию. Обнаружение увеличения правого желудочка позволяет заподозрить дирофиляриоз.

Эхокардиография относительно более чувствительна в обнаружении индуцированного гельминтами увеличения правого отдела сердца. Перекрестная эхокардиография может время от времени демонстрировать гельминтов в легочной артерии.

Гематологические и биохимические изменения крови не позволяют поставить диагноз дирофиляриоза, но они позволяют определить параллельное заболевание, которое может или не может быть связано с дирофиляриозом.

Наиболее часто при дирофидяриозе встречаются гипохромная нерегенеративная анемия, нейтрофилия ( 20-80% случаев), эозинофилия (85% случаев) и базофилия (60%). В тяжелых случаях, особенно, если порок присутствует сердечная недостаточность повышается активность АлАТ и АсАТ (10% случаев), иногда отмечается гипербилирубинемия.

Азотемия, наблюдаемая только в 5% случаев, может быть внепочечного происхождения, если присутствуют дегидратация или порок сердца, или может быть вторична при гломерулонефрите. Гломерулонефрит может усложнять клиническую картину. При исследовании мочи редко выявляют изостенурию, чаще наблюдается альбуминурия (10-30% случаев).

Источник: https://zooclub.ru/dogs/vet/105-2.shtml

Диагностика дирофиляриоза

Метод кнотта дирофиляриоз

дирофиляриоз плотоядный собака болезнь

По данным многих авторов при постановке диагноза на дирофиляриоз необходимо учитывать следующие показатели:

• Анамнестические данные – прибытие из эндемической области или нахождение в ней.

• Клинические признаки болезни,

• Выделение микрофилярий из крови животного.

• Дополнительные лабораторные исследования

Личинок дирофилярий в крови можно обнаружить следующими лабораторными методами:

· Прямая микроскопия капли свежей крови под малым увеличением микроскопа наиболее легкий, удобный и быстрый метод диагностики дирофиляриоза. Подвижные личинки паразита заметны по их активному движению между эритроцитами.

Этот метод дает надежные результаты только при высокой интенсивности инвазии.

Недостатками этого метода являются: трудность диагностирования дирофиляриоза при низкой интенсивности инвазии, необходимость иметь под рукой микроскоп в рабочем положении и предметные стекла, исследование необходимо проводить сразу же после взятия крови, что создает неудобства в работе. Кроме того, при малой подвижности микрофилярий их бывает трудно обнаружить среди большого количества эритроцитов. При высокой температуре окружающего воздуха, свежий мазок крови быстро высыхает, что создает дополнительные трудности в исследовании.

· Исследование цельной сыворотки крови – для исследования сыворотки крови в пробирку берут несколько миллилитров венозной крови от собаки. Кровь сворачивается, и микрофилярии мигрируют в сыворотку. Сыворотка со сгустком должна постоять в пробирке несколько часов.

После этого пастеровской пипеткой берут несколько капель сыворотки со дна пробирки или из места на границе сыворотки и сгустка крови. Эти капли помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа на наличие подвижных микрофилярий.

Если кровь до исследования находилась в холодильнике, то предметное стекло с каплями сыворотки выдерживают несколько минут при комнатной температуре для того, чтобы личинки дирофилярий восстановили свою подвижность.

Недостатками этого метода диагностики являются: возможность постановки диагноза только через определенное время (около двух часов необходимо для отстаивания сыворотки крови).

Преимущества метода: исследованиями на дирофиляриоз можно заниматься в свободное время, не отвлекаясь от основной работы; так как личинки дирофилярий сохраняют свою подвижность в сыворотке крови при комнатной температуре до трех суток, а в холодильнике при температуре +2…+4°С до одной недели.

Даже после их гибели, при наличии определенного опыта, микрофилярии легко можно обнаружить в сыворотке крови. При сворачивании крови образуется сыворотка, объем которой почти в два раза меньше цельной крови, это способствует концентрации микрофилярий и облегчает их обнаружение при невысокой интенсивности инвазии. Кроме того, в сыворотке легче обнаружить микрофилярии, чем в цельной крови, так как в данном случае отсутствуют форменные элементы крови, мешающие исследованию.

· Метод Куликова – 20 мл венозной крови смешивают с 2 мл 3,8% водного раствора лимоннокислого натрия (цитрата натрия) и отстаивают 20-30 минут.

По истечении этого времени в пробирке образуется 3 слоя: внизу – эритроциты, в середине – лейкоциты и микрофилярии, вверху – плазма крови.

Берут пипеткой средний слой, каплями наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют при малом и среднем увеличении.

· Архиповой Д.Р. разработан количественный метод прижизненной диагностики дирофиляриозов собак основанный на применении меланжера для подсчета количества лейкоцитов и счетной камеры Фукс-Розенталя.

Меланжер до метки I заполняют кровью и до метки II раствором, состоящим из ледяной уксусной кислоты, раствора фуксина и дистиллированной воды в соотношении 3:4:93. Для равномерного смешивания меланжер с кровью и раствором кладут на вибратор на 2-3 минуты.

К чистой и сухой камере Фукс-Розенталя притирают покровное стекло до появления колец Ньютона. Затем раствор в меланжере встряхивают, и каплю (но не первую) раствора наносят на среднюю часть пластинки камеры и при увеличении микроскопа в 100 раз подсчитывают количество микрофилярий во всех квадратах.

Полученное количество личинок умножают на 6,23, так как для 20 мм3 раствора потребовалось бы 6,23 объема камеры. Для определения количества микрофилярий в 1 мл крови число выявленных микрофилярий в 20 мм3 умножается на 50.

· Исследование крови для обнаружения микрофилярий может быть облегчено добавлением вещества, вызывающего гемолиз. При этом методе периферическую кровь собак исследуют сразу после взятия (на месте).

Каплю крови помещают на предметное стекло, добавляют две капли дистиллированной воды или 1%-ного водного раствора уксусной кислоты, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа.

· При использовании метода с применением уксусной кислоты к 1 мл венозной крови сразу же приливают 5 мл 2%-ного раствора уксусной кислоты. Смесь центрифугируют при 1000 об/мин. В течение 3-5 минут. Надосадочную жидкость выливают, а осадок микроскопируют для обнаружения микрофилярий. При этом методе личинки погибают, и их бывает трудно обнаружить в исследуемом материале.

· Метод Руже-Мюленса – к крови добавляют пятикратный объем раствора: 5%-ный формалина 95 мл, уксусной кислоты 5 мл и концентрированного спиртового раствора генцианвиолета 2 мл.

Смесь центрифугируется, надосадочная жидкость сливается, а осадок опять центрифугируют с водой и смотрят под микроскопом.

Этот метод можно упростить: каплю крови помещают в пробирку с раствором и микроскопируют на следующий день.

· Метод Шуффнера – 10 капель крови помещают в 10 мл физиологического раствора, к которому предварительно добавили несколько капель раствора сапонина. После гемолиза, производят центрифугирование. Живые, подвижные личинки обнаруживаются в осадке.

· Модифицированный метод Кнотта дает хорошие результаты при практической постановке диагноза на наличие микрофилярий у собак, Метод заключается в следующем: к 1 мл венозной крови добавляют 10 мл 2%-ного раствора формалина.

Этот раствор хорошо перемешивают и центрифугируют при 1500 об/мин. в течение 5 минут. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок смешивают с равным объемом метиленового синего в разведении 1:1000 и оставляют для окрашивания на 5 минут.

Окрашенный осадок микроскопируют для обнаружения фиксированных микрофилярий.

К дополнительным методам исследования относятся следующие:

1. Морфологические и биохимические исследования крови – не позволяют поставить точный диагноз на дирофиляриоз, но помогают определить патологические изменения в органах и тканях, которые могут быть связаны с дирофиляриозом. Наиболее часто при дирофиляриозе отмечают нормоцитарную, нормохромную или гипохромную анемию (гематокрит

Источник: https://studbooks.net/1968474/meditsina/diagnostika_dirofilyarioza

Терапевт Воробьёв
Добавить комментарий